致瘤性检测
样本要求
致瘤性检测用于评价细胞基质或其成分在动物体内诱导宿主细胞形成肿瘤的能力。实验采用新生(出生 3 日龄内)裸鼠、新生仓鼠或新生大鼠,接种数量通常多于成瘤性检测。待检样品可为细胞裂解物或全细胞 DNA,来源于 MCB 或 WCB,扩增至或超过生产用体外细胞龄的 3–10 倍增水平。细胞裂解物通过冻融及低速离心等方法制备,悬浮于 PBS 中,取 50–100 μl(相当于 10^7 个细胞)皮下注射;细胞 DNA 取 50–100 μl(≥100 μg)皮下注射,阳性对照可使用致瘤性 DNA 质粒,阴性对照可用 PBS。接种后至少观察 16 周,每周触摸和记录注射部位结节的形成及变化,必要时进行双向测量以判定结节是进行性、稳定或消退。观察期末处死动物,对注射部位及主要器官(肝、心、肺、脾、局部淋巴结等)进行肉眼及组织学检查,建立疑似瘤的细胞系并可冻存以供分子分析。若形成的肿瘤基因型显示来源于宿主而非接种细胞,则判定为致瘤性阴性;如出现进行性结节或肿瘤,应进一步分析致瘤性因子及活性,并评估细胞基质的可适用性。








