通常取至少10⁷个活细胞，使用基础培养基制备细胞裂解物。将裂解物接种于适宜的固体培养基（如罗氏培养基或Middlebrook 7H10培养基），每个培养基接种1 ml并做三重复，同时设置不高于100 CFU的草分枝杆菌菌液作为阳性对照。在37℃下培养56天，阳性对照应出现菌落生长，而供试品未见菌落则判为合格。也可采用经验证的分枝杆菌核酸检测法作为培养法的替代。